分子生物学的研究方法およびその使用

分子生物学的研究方法は、現代医学、法医学科学、生物学において重要な役割を果たしています。 DNAおよびRNAの研究の進歩のおかげで、人など、酸の混合物中に所望の核酸を認識するために、原因物質を決定する生物のゲノムを探索することが可能です

分子生物学的方法。 それは何ですか？

戻る科学者の70-80sで解読した最初の ヒトゲノムを。 このイベントは、遺伝子工学や分子生物学の発展に弾みを与えました。 DNAやRNAの性質の研究は、病気の診断、研究遺伝子の目的のためにこれらの核酸を使用することが可能になりましたことを意味しています。

DNAとRNAの調製

分子生物学的 診断方法は 、多くの場合、この：出発材料が必要 核酸。 生物の細胞からこれらの物質を選択する方法はいくつかあります。 それぞれの長所と短所があり、そして純粋な形で核酸を単離する方法を選択する際には考慮されるべきです。

MarmurによるDNAの調製。 この方法は、純粋なDNAが得られた沈殿、アルコール物質の混合物を処理することからなります。 この方法の欠点は、腐食性物質、フェノールおよびクロロホルムを使用することです。

ブーム上のDNAの2分離。 ここで使用される主な物質は - チオシアン酸グアニジン（のGuSCN）です。 それの堆積促進デオキシリボ核酸 、それが続いて特別なバッファを用いて収集することができ、そこから特殊な基板上に。 ただしのGuSCNは - TCPの阻害剤であり、そしてその小さな部分が核酸で作業する際に重要であるポリメラーゼ連鎖反応、のコースに影響を与えることができるDNAに堆積します。

不純物の3.降水。 この方法は、分子自体がdehoksiribonukleinovoy酸及び不純物が堆積されていないという点で、以前のものとは異なります。 これを行うには、イオン交換体を使用します。 欠点はないすべての物質が落ち着くことができるということです。

4.マススクリーニング。 あなたはDNA分子の構造、およびいくつかの統計情報を取得する必要性についての正確な情報を持っている必要はありません場合は、この方法は、例で使用されています。 その理由は、界面活性剤、特にアルカリを取り扱う場合、核酸構造体が損傷することができることです。

研究方法の分類

研究のすべての分子の生物学的方法は、三つの主要なグループに分けられます。

（複数の酵素を使用）1.増幅。 診断法の多くで重要な役割を果たしているポリメラーゼ連鎖反応、 - これは、PCRが含まれています。

2. Neamplifikatsionnye。 方法のこのグループは、核酸混合物の作業に直接関連しています。 実施例3種類ブロットである、in situハイブリダイゼーション、等

特定のDNA又はRNAプローブに特異的に結合するプローブ分子からの信号の認識に基づいて3.方法。 例 - ハイブリダイゼーションシステムHybride社キャプチャシステム溶液（HC2）。

分子生物学的研究方法で使用することができる酵素

多くの分子診断技術は、酵素の幅広い範囲の使用を含みます。 以下は、最も頻繁に使用されます。

1.制限酵素 - 必要な部品にDNA分子を「カット」。

前記DNAポリメラーゼは、 - 二本鎖デオキシリボ核酸分子を合成します。

3.逆転写酵素（逆転写酵素） - RNA鋳型からDNAを合成するために使用されます。

4. DNAリガーゼは - ヌクレオチド間ホスホジエステル結合の形成のための責任があります。

5.エキソヌクレアーゼ - デオキシリボ核酸分子の端部からヌクレオチドを除去します。

PCR - DNA増幅の基本的な方法

ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）は、 現代の分子生物学において広く使用されています。 単一のDNA分子が複製（増幅分子）の多数を得ることができるこの方法。

PCRの主な機能：

- 疾患の診断;

- 、DNAセグメントをクローニングする遺伝子。

最初のDNA分子、熱安定性DNAポリメラーゼ（Taqポリメラーゼまたはpfu）の、デオキシリボヌクレオチドリン酸（窒素塩基の源）、プライマー（2プライマー1つのDNA分子）自体行うことができる緩衝系：ポリメラーゼ連鎖反応を実施するには、次の要素を必要とします全ての反応。

変性、プライマーアニーリングおよび伸長：PCRは、3つのステップで構成されています。

1.変性。 94-95摂氏のproshoditの温度でDNAの二つの鎖間の水素結合を破壊し、その結果として、我々は2つの一本鎖分子を得ます。

2.アニーリングしたプライマー。 50-60度の温度で摂氏相補の種類に応じて、一本鎖核酸分子の末端にアクプライマーを生じます。

3.伸び。 72度の温度で、娘二本鎖デオキシリボ核酸分子を合成します。

DNAシークエンシング

分子生物学的研究方法は、多くの場合、デオキシリボ核酸分子中のヌクレオチド配列の知識を必要とします。 決定するために、 遺伝子コード 配列を決定します。 将来の分子診断は、ヒト配列の決意に得られた知識に基づいて説明します。

シーケンシング、次の種類：

• マクサム・ギルバートによる配列決定。
• サンガー配列決定。
• パイロシークエンシング;
• nanoporovoeシーケンシング。